有關標準曲線

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標準曲線的做法依據(jù)？


GB/T22554-2010《基于標準樣品的線性校準》中：

1、標準曲線的濃度范圍應覆蓋正常操作條件下的被測量范圍；

2、標準樣品的組分盡量與被測樣品組分一致；

3、標準樣品的濃度值應等距離的分布在被測量范圍；

4、標準樣品的個數(shù)至少應有3個濃度；

5、每個標準點至少重復2次，這個重復是指從稀釋開始；

如果國家標準有相應的濃度系列推薦，盡量按國家標準。工作中我們經(jīng)常采用線性校準，因為線性方程為簡潔。





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什么是校準曲線？


校準曲線包括標準曲線和工作曲線，前者用標準溶液系列直接測量，沒有經(jīng)過預處理過程，這對于樣品往往造成較大誤差；而后者所使用的標準溶液經(jīng)過了與樣品相同的消解、凈化、測量等全過程。





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首先標曲要做幾個點？


標準曲線需要幾個數(shù)據(jù)點，是由所檢測組分的濃度范圍、分析儀響應特性、干擾因素、濃度與檢測信號響應類型有關的。

3個點：對于一些低濃度，特別是微量分析，并且濃度范圍不是很大的，檢測器響應可靠，背景干擾非常小的，則可以選用較少的工作點就行，一般有3個濃度點就足夠了，有些甚至可以只用一個濃度點就行，另一個點直接用坐標原點。



4~6 個點：對于平時測量的樣品濃度范圍較寬，并且檢測器響應不*是一次曲線（直線）的，可以采用二次曲線或分段校正方式，以減少數(shù)據(jù)偏差，這種情況就需要多用幾個數(shù)據(jù)點，如果不分段，數(shù)據(jù)點有4~6 個就夠用。



至少兩個點：但如果是分段校正，則每段需要至少兩個數(shù)據(jù)點。而對于一些樣品無濃度范圍規(guī)律的，特別是一些檢測機構(gòu)，如果分析儀的檢測響應可靠，環(huán)境因素影響少的，可以做校正曲線。若是環(huán)境因素影響大的，則不必做校正曲線，而采用標準加入法或標準加入-一次稀釋法反而簡便一些。



實際上，我們一般是做五個點（不包括零濃度）；一般以檢出限的5~10倍為第一個點，以后根據(jù)1倍遞增，高濃度是低濃度的10~20倍為宜（理化分析實驗為例）。當然，要根據(jù)儀器的靈敏度來調(diào)整。





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標曲R值是幾個9才合格？


實驗室應按檢測標準（方法）的要求使用標準溶液或標準物質(zhì)建立標準曲線。所用標準溶液或標準物質(zhì)應覆蓋被測樣品的濃度范圍。檢測標準（方法）如無具體的要求，至少使用5個標樣（除空白外）建立線性標準曲線，每個點重復測定1-3次，對于篩選方法，線性回歸方程的相關系數(shù)不應低于0.98，對于確證方法，相關系數(shù)不應低于0.99。

其實，大于0.99是判斷是否為線性相關的一個標準，實際應用中線性大于0.999才是比較理想的。線性在0.99到0.999之間的監(jiān)測結(jié)果只用接近高濃度一半（中間濃度）的位置才比較準確，如果線性大于0.999的話，在整個線性范圍內(nèi)都會有一個比較滿意的結(jié)果。



如果檢測的線性不好，可以減少標準的覆蓋范圍，將標準的濃度調(diào)整到待測樣品濃度附近，這樣結(jié)果也是非常準確的。例如，樣品的濃度約20ppb，但在0~50ppb范圍建立標準曲線，但線性非常不理想，這時可以將標準范圍調(diào)整到15~25ppb之間，作五個標準。





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標準曲線的檢驗？


（1）線性檢驗:

即檢驗校準曲線的精密度。對于以4～6個濃度單位所獲得的測量信號值繪制的校準曲線，分光光度法一般要求其相關系數(shù) | r | ≥0.9990，否則應找出原因并加以糾正，重新繪制合格的校準曲線。



（2）截距檢驗：

即檢驗校準曲線的準確度，在線性檢驗合格的基礎上，對其進行線性回歸，得出回歸方程 y= a+bx ，然后將所得截距a與0作t檢驗，當取95%置信水平，經(jīng)檢驗無顯著性差異時，a可做0處理，方程簡化為y= bx，移項得x=y/b。在線性范圍內(nèi)，可代替查閱校準曲線，直接將樣品測量信號值經(jīng)空白校正后，計算出試樣濃度。



當a與0有顯著性差異時，表示校準曲線的回歸方程計算結(jié)果準確度不高，應找出原因予以校正后，重新繪制校準曲線并經(jīng)線性檢驗合格。在計算回歸方程，經(jīng)截距檢驗合格后投入使用。



回歸方程如不經(jīng)上述檢驗和處理，就直接投入使用，必將給測定結(jié)果引入差值相當于解決a的系統(tǒng)誤差。



（3）斜率檢驗:

即檢驗分析方法的靈敏度，方法靈敏度是隨實驗條件的變化而改變的。在*相同的分析條件下，僅由于操作中的隨機誤差導致的斜率變化不應超出一定的允許范圍，此范圍因分析方法的精度不同而異。例如，一般而言，分子吸收分光光度法要求其相對差值小于5%，而原子吸收分光光度法則要求其相對差值小于10%等等。





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標準曲線有效期的規(guī)定？


（1）標準曲線屬于實驗室質(zhì)量控制的范圍，按照《實驗室資質(zhì)認定評審準則》中結(jié)果控制的要求：定期使用有證標準物質(zhì)（參考物質(zhì)）進行監(jiān)控和/或使用次級標準物質(zhì)（參考物質(zhì)）開展內(nèi)部質(zhì)量控制。



（2）準則中并未對“定期”進行規(guī)定，所以如果“定期”，就根據(jù)實驗室的實際情況來定了。



（3）既然準則上沒說明，那根據(jù)一般的分析教材，當實驗條件（包括藥劑、人員、儀器等）發(fā)生變化時，好重新制作標準曲線。一般來說儀器如果使用，并經(jīng)過檢定，是處于穩(wěn)定狀態(tài)，而人員藥劑的變化往往會較大。如果說每次換個人操作都要換曲線，那工作量就太大了。